Is e aon de na prìomh bhuannachdan a tha aig cultar cealla an comas a bhith a’ làimhseachadh ceimigeachd fiosaigeach ath-riochdachadh cealla (ie teòthachd, pH, cuideam osmotic, teannachadh O2 agus CO2) agus àrainneachd eòlas-inntinn (ie dùmhlachd hormona agus beathachaidh).A bharrachd air teòthachd, tha àrainneachd a’ chultair fo smachd a’ mheadhan fàis.
Ged nach eil an àrainneachd eòlas-inntinn de chultar cho soilleir ris an àrainneachd fiosaigeach agus ceimigeach aige, tuigse nas fheàrr air co-phàirtean serum, comharrachadh factaran fàis a tha riatanach airson iomadachadh, agus tuigse nas fheàrr air meanbh-àrainneachd cheallan ann an cultar.(Ie eadar-obrachadh cealla-cealla, sgaoileadh gas, eadar-obrachadh leis a’ mhaitrix) a-nis a’ leigeil le cuid de loidhnichean cealla a bhith air an àiteachadh ann am meadhanan gun serum.
Tha àrainneachd 1.Culture a 'toirt buaidh air fàs cealla
Thoir an aire gu bheil na suidheachaidhean cultar cealla eadar-dhealaichte airson gach seòrsa cealla.
Tha na buaidhean bho bhith a’ gluasad bho na suidheachaidhean cultair a tha riatanach airson seòrsa cealla sònraichte a’ dol bho bhith a’ cur an cèill phenotypes neo-àbhaisteach gu fàilligeadh iomlan cultar cealla.Mar sin, tha sinn a’ moladh gum fàs thu eòlach air an loidhne cealla anns a bheil ùidh agad agus gun lean thu gu teann ris an stiùireadh a chaidh a thoirt seachad airson gach toradh a chleachdas tu nad dheuchainn.
2.Precautions airson àrainneachd cultar cealla làn-leasaichte a chruthachadh airson do cheallan:
Meadhanan cultarail agus serum (faic gu h-ìosal airson tuilleadh fiosrachaidh)
Ìrean pH agus CO2 (faic gu h-ìosal airson tuilleadh fiosrachaidh)
Àiteach plastaig (faic gu h-ìosal airson tuilleadh fiosrachaidh)
Teòthachd (faic gu h-ìosal airson barrachd fiosrachaidh)
2.1 Meadhanan Cultarach agus Serum
Is e am meadhan cultair am pàirt as cudromaiche de àrainneachd a’ chultair, leis gu bheil e a’ toirt seachad na beathachadh, na factaran fàis agus na hormonaichean a tha a dhìth airson fàs cealla, agus a’ riaghladh pH agus cuideam osmotic a’ chultair.
Ged a chaidh na ciad dheuchainnean cultar cealla a dhèanamh a’ cleachdadh meadhanan nàdarra a fhuaireadh bho earrannan clò agus lionntan bodhaig, lean an fheum air cunbhalachadh, càileachd mheadhanan, agus barrachd iarrtais gu bhith a’ leasachadh meadhanan deimhinnte.Is e na trì seòrsaichean meadhanan bunaiteach meadhanan basal, meadhanan serum lùghdaichte agus meadhanan gun serum, agus tha riatanasan eadar-dhealaichte aca airson leasachadh serum.
2.1.1 Meadhan bunaiteach
Meadhan cultar cealla Gibco
Bidh a’ mhòr-chuid de loidhnichean cealla a’ fàs gu math ann am meadhanan bunaiteach anns a bheil amino-aigéid, vitamain, salainn neo-organach, agus stòran gualain (leithid glùcois), ach feumar cur ris na cruthan meadhanan bunaiteach sin le serum.
2.1.2 Meadhan serum lùghdaichte
Botal le Gibco Serum Meadhanach Ìosal
Is e ro-innleachd eile airson droch bhuaidh serum a lughdachadh ann an deuchainnean cultar cealla a bhith a’ cleachdadh meadhanan lùghdaichte serum.Tha meadhan serum lùghdaichte na fhoirmle meadhanach bunaiteach a tha beairteach ann am beathachadh agus factaran a thig bho bheathaichean, a dh’ fhaodadh an ìre de serum a tha a dhìth a lughdachadh.
2.1.3 Meadhan gun serum
Botal le meadhan gun serum Gibco
Bidh meadhan gun serum (SFM) a’ seachnadh cleachdadh serum bheathaichean le bhith a’ cuir an àite serum le beathachadh iomchaidh agus cumaidhean hormona.Tha cumaidhean meadhanach gun serum aig mòran de phrìomh chultaran agus loidhnichean cealla, a’ toirt a-steach loidhne cinneasachaidh pròtain ath-leasaichte Hamster Ovary (CHO), grunn loidhnichean cealla hybridoma, loidhnichean biastagan Sf9 agus Sf21 (Spodoptera frugiperda), a bharrachd air an aoigh airson cinneasachadh bhìoras. (mar eisimpleir, 293, VERO, MDCK, MDBK), msaa. Is e aon de na prìomh bhuannachdan bho bhith a’ cleachdadh meadhan gun serum an comas am meadhan a dhèanamh roghnach airson seòrsachan cealla sònraichte le bhith a’ taghadh measgachadh iomchaidh de fhactaran fàis.Tha an clàr a leanas ag innse mu na buannachdan agus na h-eas-bhuannachdan a tha aig meadhanan gun serum.
Buannachd
Meudaich soilleireachd
Coileanadh nas cunbhalaiche
Glanadh nas fhasa agus giollachd sìos an abhainn
Dèan measadh ceart air gnìomhachd cealla
Meudachadh cinneasachd
Smachd nas fheàrr air ath-bheachdan fios-eòlasach
Lorgaidh meadhanan cealla leasaichte
Eas-bhuannachd
Seòrsa cealla sònraichte riatanasan foirmle meadhanach
Feum air purity reactant nas àirde
Slaodadh ann am fàs
2.2.1 ìre pH
Bidh a’ mhòr-chuid de loidhnichean cealla mamalan àbhaisteach a’ fàs gu math aig pH 7.4, agus tha na h-eadar-dhealachaidhean eadar diofar loidhnichean cealla beag.Ach, thathas air sealltainn gu bheil cuid de loidhnichean cealla cruth-atharraichte a’ fàs nas fheàrr ann an àrainneachd beagan searbhagach (pH 7.0 - 7.4), agus is fheàrr le cuid de loidhnichean cealla fibroblast àbhaisteach àrainneachd beagan alcalin (pH 7.4 - 7.7).Bidh loidhnichean cealla biastagan leithid Sf9 agus Sf21 a’ fàs nas fheàrr aig pH 6.2.
2.2.2 CO2 ìre
Bidh am meadhan fàis a’ cumail smachd air pH a’ chultair agus a’ bufair na ceallan sa chultar gus seasamh an aghaidh atharrachaidhean ann am pH.Mar as trice, bidh am buffering seo air a choileanadh le bhith a 'toirt a-steach bufairean organach (mar eisimpleir, HEPES) no CO2-bicarbonate.Leis gu bheil pH a’ mheadhan an urra ri cothromachadh fìnealta carbon dà-ogsaid leaghte (CO2) agus bicarbonate (HCO3-), atharraichidh atharrachaidhean ann an CO2 àile pH a’ mheadhan.Mar sin, nuair a bhios tu a’ cleachdadh bufair meadhanach le bufair stèidhichte air CO2-bicarbonate, feumar CO2 exogenous a chleachdadh, gu sònraichte nuair a bhios tu ag àiteachadh cheallan ann an soithichean cultarach fosgailte no a’ àiteachadh loidhnichean cealla cruth-atharraichte aig dùmhlachdan àrd.Ged a bhios a 'mhòr-chuid de luchd-rannsachaidh mar as trice a' cleachdadh 5-7% CO2 san adhar, mar as trice bidh a 'mhòr-chuid de dheuchainnean cultar cealla a' cleachdadh 4-10% CO2.Ach, tha teannachadh CO2 agus dùmhlachd bicarbonate air a mholadh aig gach meadhan gus am pH ceart agus cuideam osmotic a choileanadh;airson tuilleadh fiosrachaidh, thoir sùil air stiùireadh an neach-dèanamh meadhanach.
2.3 Ag àrach plastaic
Tha plastaic cultar cealla rim faighinn ann an grunn chruthan, mheudan agus uachdar gus freagairt air diofar thagraidhean cultar cealla.Cleachd an iùl uachdar plastaig cultar cealla agus an stiùireadh container cultar cealla gu h-ìosal gus do chuideachadh le bhith a’ taghadh am plastaig cheart airson an tagradh cultar cealla agad.
Thoir sùil air a h-uile plastaic cultar cealla Thermo Scientific Nunc (ceangal sanasachd)
2.4 Teòthachd
Tha an teòthachd as fheàrr airson cultar cealla gu ìre mhòr an urra ri teòthachd bodhaig an aoigh às a bheil na ceallan air an dealachadh, agus gu ìre nas lugha air na h-atharrachaidhean anatomical ann an teòthachd (mar eisimpleir, faodaidh teòthachd craiceann a bhith nas ìsle na teòthachd fèithe cnàimhneach. ).Airson cultar cealla, tha cus teasachadh na dhuilgheadas nas miosa na cus teasachadh.Mar sin, mar as trice bidh an teòthachd anns an goireadair air a shuidheachadh beagan nas ìsle na an teòthachd as fheàrr.
2.4.1 An teòthachd as fheàrr airson diofar loidhnichean cealla
Tha a’ mhòr-chuid de loidhnichean cealla daonna is mamail air an cumail aig 36 ° C gu 37 ° C airson an fhàs as fheàrr.
Tha ceallan biastagan air an àiteachadh aig 27 ° C airson an fhàs as fheàrr;bidh iad a 'fàs nas slaodaiche aig teòthachd nas ìsle agus teòthachd eadar 27 ° C agus 30 ° C.Os cionn 30 ° C, bidh spionnadh cheallan meanbh-bhiastagan a’ lughdachadh, eadhon ged a thilleas e gu 27 ° C, chan fhaigh na ceallan air ais.
Feumaidh loidhnichean cealla adhair 38.5 ° C gus an fhàs as motha a ruighinn.Ged a ghabhas na ceallan sin a chumail aig 37 ° C, fàsaidh iad nas slaodaiche.
Faodaidh loidhnichean cealla a thig bho bheathaichean le fuil fhuar (leithid muir-thìrich, iasg uisge fuar) raon teòthachd farsaing de 15 ° C gu 26 ° C fhulang.
Uair a’ phuist: Feb-01-2023